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    核酸純化的方法及原理

    發布時間:2022-08-19      點擊次數:148
      核酸抽提與純化是分子生物學試驗的基礎,核酸純化方法是影響提取核酸質量高低的最重要因素,也是下游分子生物學試驗成敗的關鍵。
     
      核酸純化的方法及原理如下:
     
      一、PC抽提法
     
      PC 抽提是去除蛋白質有效的手段,但超過了該飽和度,裂解體系中的蛋白質不會被一次去除,必須靠多次抽提,方可徹底去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質難以徹底去除,以及基因組 DNA 會斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC 抽提的另外一個用途是,利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特點,在 RNA 抽提時獲得 DNA 殘留極少的 RNA。不過有一點要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質之前,是不能使用 PC 抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提最大的優勢是成本低廉,對實驗條件要求較低,對于經費緊張的實驗室較為實用。
     
      二、高鹽沉淀法
     
      高鹽沉淀蛋白質/醇沉淀方法,同樣也是一個非常不錯的方法。與 PC 抽提方法相比,除了純度的穩定性可能要低一點外,該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點。更快、更輕松的去除蛋白質所可以用于大規模抽提,但其不足之處是純度 (蛋白質殘留) 不夠穩定,蛋白質的沉淀效率在4℃會更好一些。
     
      三、離心柱法
     
      離心柱純化法,是目前試劑盒提取廣泛應用的方法。其最大特點是受人為操作因素影響小,純度的穩定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進入另外一個離心管中,與含有核酸的柱子完全是分開的,所以洗滌更徹底。其致命弱點是樣品過量,提取效率較低,且需要反復離心,操作復雜,成本也較高。
     
      四、生物磁珠法
     
      生物磁珠法是將純化介質包被在納米級生物磁珠表面,通過介質對核酸的吸附,在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動,從而達到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比,生物磁珠法具有很多的優勢,如:
     
     ?、偬崛§`敏度高(微量材料即可提取)
     
     ?、诩兓兌雀?完全與蛋白鹽等雜質分離)
     
     ?、厶崛‘a量高(每mg磁珠能吸附500ug DNA)
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