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    影響細胞轉染效率的因素有哪些?

    發布時間:2022-08-19      點擊次數:48
      細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
      影響細胞轉染效率的因素有哪些?
      1.轉染試劑的選擇
      不同細胞系轉染效率通常不同,但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要,因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。
      每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇適合實驗設計的轉染試劑。當然,適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。
      2.細胞狀態
      一般低的細胞代數(<50)能確?;蛐筒蛔?。適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞,細胞生長旺盛,最容易轉染。
      細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株,在各實驗室不同培養條件下,其生物學性狀發生不同程度的改變,導致其轉染特性也發生變化。
      因此,如果發現轉染效率降低,可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復結果。
      3.轉染方法
      轉染時應根據具體轉染試劑推薦的方法進行,但也要根據實驗室的條件來確定轉染條件。
     ?。?)細胞培養物
      推薦在轉染前24小時分細胞,這將提供正常細胞代謝,增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌,支原體或真菌的污染。
     ?。?)細胞密度
      細胞密度對轉染效率有一定的影響。如果選用新的細胞系或者新的轉染試劑,最好能夠進行優化實驗并為以后的實驗建立一個穩定方法,包括適當的接種量和培養時間等等。
     ?。?)血清
      對于主流的轉染試劑來說,血清的存在不會影響轉染效率,甚至還有助于提高轉染效率。
      不過要特別注意:對于RNA轉染,如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關注的。
      胎牛血清經常用到,便宜一點的有馬或牛血清。通常的,血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物,對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質量的變化直接影響細胞生長,因此也會影響轉染效率。新加培養基的預熱對細胞轉染很有幫助。
     ?。?)氮磷(N/P)比
      N/P比是轉染效率的關鍵(為了換算方便,一般以DNA/轉染試劑質量比表示),在一定比例范圍內轉染效率隨N/P比成比例增高,之后達到平值,但毒性也隨之而增加,因此在實驗之前應根據推薦比例,確定本實驗的最佳轉染比例。
     ?。?)DNA質量
      DNA質量對轉染效率影響非常大。應盡可能提高DNA的純度。
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