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    提高細胞轉染效率的方法有哪些?

    發布時間:2022-09-15      點擊次數:22
      轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍;化學介導方法:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法:有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術,是目前轉染效率較高的方法,同時具有細胞毒性很低的優勢。但是病毒轉染方法的準備程序復雜,常常對細胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法,則各有其特點。
      提高細胞轉染效率的方法有哪些?
      1.選擇合適的轉染試劑
      不同細胞系轉染效率通常不同,但細胞系的選擇通常是根據實驗的需要,因此在轉染實驗前應根據實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻,通過這些資料可選擇適合實驗設計的轉染試劑。當然,適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。
      2.保持佳的細胞狀態
      一般低的細胞代數(<50)能?;蛐筒蛔?。適合轉染的細胞是經過幾次傳代后達到指數生長期的細胞,細胞生長旺盛,容易轉染。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變,總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。也就是說同一種系的細胞株,在各實驗室不同培養條件下,其生物學性狀發生不同程度的改變,導致其轉染特性也發生變化。因此,如果發現轉染效率降低,可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。
      3.選擇高效的轉染方法
      不同轉染試劑有不同的轉染方法,但大多大同小異。轉染時應跟據具體轉染試劑推薦的方法,但也要注意,因不同實驗室培養的細胞性質不同,質粒定量差異,操作手法上的差異等,其轉染效果可能不同,應根據實驗室的具體條件來確定較佳轉染條件。
      4.所構建載體的質量。
      轉染載體的構建(病毒載體,質粒DNA,RNA,pcr產物,寡核苷酸等)也影響轉染結果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高,但不同病毒載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細胞周期,如逆轉錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構建外,載體的形態及大小對轉染效率也有不同的影響,如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩定轉染的影響。如果基因產物對細胞有毒性作用,轉染也很難進行,因此選擇組成或可調控,強度合適的啟動子也很重要,同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。
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