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    Alexa Fluor 488 標記鬼筆環肽(綠色)使用說明書

    發布時間:2017/11/17      點擊次數:5875

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    Alexa Fluor 488-Phalloidin, Alexa Fluor488 標記鬼筆環肽

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    價格(元)

    Alexa Fluor 488 標記鬼筆環肽(綠色)

    C6242L0520

    300 T

    -20℃

    1950

     

    產品描述

    鬼筆環肽是從一種菌類Amanita Dhalloides所提取出來的環肽。它與F-actin競爭性的結合。熒光標記的鬼筆環肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結合并且易溶于水,為檢測組織切片,培養細胞和無細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。

    本品為Alexa Fluor488標記的鬼筆環肽,可發出高亮度、穩定的綠色熒光,染色反應特異性強,對比性高,適合用作F-actin的定性和定量檢測。與Actin抗體比較,Alexa Fluor488 鬼筆環肽具有如下優點:1)與actin亞單位一比一結合,并且不與G-actin結合,具有比Actin抗體更好的染色效果;2)且本品的結合沒有物種差異性,適用性廣泛;3)鬼筆環肽標記的非特異性信號可忽略,因而圖像的反差較好;4)染色與用于細胞分析的其他熒光染色完全兼容,包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他Alexa Fluor偶聯物(包含Alexa Fluor偶聯二抗);5)經本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。

    技術資料

    1. Ex(nm):493

    2. Em(nm):517

    3. 分子量:1900

    4. 溶劑:DMSO

    5. 結構式:

     

    運輸與保存方法

    冰袋運輸。收到貨后-20℃避光干燥保存,1年有效。

    使用方法:

    1.   準備1000x DMSO Alexa FluorTM 488標記鬼筆環肽存儲液

    用30µL DMSO 溶解粉末狀Alexa FluorTM 488標記鬼筆環肽,可按需分裝并于-20℃避光干燥保存,分裝保存,避免反復凍融。

    2.   準備1x Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽工作液

    吸取1µL 1000×Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽存儲液到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

    注意:不同的細胞染色狀況不同,相應Alexa Fluor 488鬼筆環肽使用量也需根據不同情況而定。

    3. 細胞染色步驟

    1)細胞培養過夜或更長,使其密度達到50-60%匯合度。

    2)吸掉培養液,37℃預熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細胞2次。

    3)使用含有3-4%甲醛的PBS溶液進行細胞固定,室溫固定10-30min。

    注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

    4)室溫條件下,用PBS清洗固定好的細胞2~3次,每次10min。

    5)(可選):室溫條件下,用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min,從而增加其通透性。

    注意:鬼筆環肽的分子量小,很容易通過細胞,一般情況下不需對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。

    6)室溫條件下,用PBS清洗細胞2~3次,每次10min。

    7)每孔加入 Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽工作液100µl/孔(96孔板),室溫避光染色20-90min,夏季時間相對短些。

    8)用PBS清洗細胞3次,每次5min,去除掉多余的Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽。

    9)(可選):加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進行復染,如:100µl/孔(96孔板),室溫3~5min。用PBS清洗細胞2次,每次5min。

    10)于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察,選擇Alexa FluorTM 488激發/發射濾片(Ex/Em=493/517nm)和/或DAPI激發/發射濾片(Ex/Em=364/454nm)。

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