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    Caspase 1活細胞凋亡檢測試劑盒(綠色)

    簡要描述:Caspase 1活細胞凋亡檢測試劑盒(綠色)主要參與促炎細胞因子的激活和細胞凋亡過程。一旦與半胱天冬酶1結合,熒光試劑保留在細胞內。結合抑制胱天蛋白酶1但不會阻止細胞凋亡的進行,有多種參數可用于監測細胞凋亡。

    • 產品型號:AC12L062
    • 廠商性質:生產廠家
    • 更新時間:2022-06-01
    • 訪  問  量:287

    詳細介紹

    品牌自營品牌貨號AC12L062
    供貨周期現貨主要用途參與促炎細胞因子的激活和細胞凋亡過程。
    應用領域生物產業

    Caspase 1活細胞凋亡檢測試劑綠色

    產品描述
      活細胞凋亡檢測試劑盒基于半胱天冬酶的熒光抑制劑。這些抑制劑具有細胞滲透性和非細胞毒性。一旦進入細胞,半胱天冬酶抑制劑與活性半胱天冬酶共價結合。 Caspase-1主要參與促炎細胞因子的激活和細胞凋亡過程。已經證明胱天蛋白酶1對肽序列Tyr-Val-Ala-Asp(YVAD)具有底物選擇性。該試劑盒使用FAM-YVAD-FMK作為半胱天冬酶1活性的熒光指示劑。 FAM-YVAD-FMK在凋亡細胞中不可逆地結合活化的半胱天冬酶1。一旦與半胱天冬酶1結合,熒光試劑保留在細胞內。結合抑制胱天蛋白酶1但不會阻止細胞凋亡的進行,有多種參數可用于監測細胞凋亡。
    產品優勢
      這種試劑盒旨在通過測量活細胞中的caspase 1活化來檢測細胞凋亡。它用于定量凋亡細胞中活化的半胱天冬酶1活性,或用于篩選半胱天冬酶1抑制劑。綠色標記試劑FAM-YVAD-FMK允許通過熒光顯微鏡,流式細胞儀或熒光酶標儀直接檢測凋亡細胞中活化的半胱天冬酶1。該試劑盒為所有必需組分提供優化的分析方案。
    技術資料
    1.Ex(nm):493
    2.Em(nm):517
    訂購信息

     

    產品名稱貨號規格價格
    Caspase 1活細胞凋亡檢測試劑綠色AC12L06225T4480


    產品組分
     

    組分規格
    A: FAM-YVAD-FMK 1 vial
    B: Washing Buffer  100 mL
    C: 500X Propidium Iodide 100 µL
    D: 500X Hoechst Stain100 µL

     
    實驗方案
    1.用密度為5×105到2×106個細胞/ mL的測試化合物制備細胞。
    2.將FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到細胞溶液中。
    3在室溫下孵育1小時。
    4.將細胞沉淀,用緩沖液或生長培養基洗滌并重懸細胞。
    5.在Ex / Em = 490 / 525nm處分析細胞。
    注】:使用前將所有部件在室溫下解凍。
    操作步驟
    1.根據您的特異性誘導方案,將細胞培養至適于細胞凋亡誘導的密度,但不超過2 x 106個細胞/ mL。同時,對于每種標記條件,以與誘導群體相同的密度培養非誘導的陰性對照細胞群。以下是一些誘導懸浮培養細胞凋亡的例子:
    (1)用2μg/ ml喜樹堿處理Jurkat細胞3小時。
    (2)用1μM星形孢菌素處理Jurkat細胞3小時。
    (3)用4μg/ ml喜樹堿處理HL-60細胞4小時。
    (4)用1μM星形孢菌素處理HL-60細胞4小時。
    注】:應對每個細胞系進行單獨評估,以確定誘導細胞凋亡的合適細胞密度。
    2.通過向FAM-YVAD-FMK(組分A)的小瓶中加入50μLDMSO制備150X FAM-YVAD-FMK DMSO儲備溶液。
    3.將150×FAM-YVAD-FMK DMSO儲備溶液(來自步驟1)以1:150的比例添加到細胞溶液中,并將細胞在37℃,5%CO 2培養箱中孵育1小時。
    注1】:對于FAM-YVAD-FMK標記,細胞可以濃縮至~5×10 6個細胞/ mL。未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO儲備溶液應分為單次使用的等分試樣并儲存在 -20 ℃。
    注2】:對于粘附細胞,用0.5mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培養基洗滌細胞一次。
    注3】:適當的孵育時間取決于所用的細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。
    4.將細胞以約200g旋轉5分鐘,并用1mL洗滌緩沖液(組分B)洗滌細胞兩次。將細胞重懸于所需量的洗滌緩沖液中。
    注1】:FAM-YVAD-FMK是熒光的,因此清除任何未結合的試劑以消除背景非常重要。
    注2】:對于分離的細胞,應將細胞濃度調節至每個微量滴定板孔中2-5×10 5個細胞/100μL等分試樣,用于步驟6。
    5.如果需要,用DNA染色標記細胞(如用于死細胞的碘化丙錠,或用于細胞核染色的整個群體的Hoechst)。
    6.通過熒光顯微鏡,流式細胞儀或熒光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm處檢測熒光強度(對于碘化丙錠,Ex / Em = 535/635 nm;對于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461納米)。
    (1)對于流式細胞儀,使用FL1通道監測熒光強度(FL2通道用于碘化丙錠染色)。
    (2)用于熒光顯微鏡和熒光酶標儀。將100μL細胞懸浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每個孔中。
    注】:如果需要平衡細胞濃度,調整誘導細胞的懸浮體積以接近非誘導細胞群的細胞密度。如果您的細胞治療不會導致受刺激細胞群數量的顯著損失,則此調整步驟是可選的。
    (3)使用FITC通道在熒光顯微鏡下觀察細胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。
    (4)使用熒光酶標儀,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm處截止)底部讀取模式監測熒光強度。
    注意事項
    該產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。


     

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