BCA蛋白定量試劑盒

產品描述
　　李記生物研制的BCA蛋白定量試劑盒可對蛋白質溶液進行高靈敏度比色定量，本試劑盒不受蛋白質種類的影響。BCA(bicinchoninic acid)是一種穩定的水溶性復合物，在堿性條件下，二價銅離子（Cu²⁺）可以被蛋白質還原成一價銅離子（Cu⁺），一價銅離子可以和BCA相互作用，兩分子的BCA螯合一個一價銅離子，形成紫色的絡合物，該復合物為水溶性，在562nm處顯示強吸光性，在0.02～2 mg/mL濃度范圍內蛋白質濃度與吸光度值成線性關系，因此可以根據待測蛋白在562 nm處的吸光度計算待測蛋白濃度。
　　由于還原劑和螯合劑對反應有阻礙，因此本制品不適用于含有還原劑（如：β－巰基乙醇，DTT等）或者螯合劑（如EDTA）的蛋白質樣品的定量。對表面活性劑的干擾影響小?？捎糜诤斜砻婊钚詣┑鞍踪|溶液的定量。
訂購信息

產品組分

保存方法
　　冰袋運輸，BCA試劑A和B室溫保存，蛋白標準請-20℃凍存。保質期12個月。
使用方法

1. 完全融化蛋白標準品，取適量蛋白標準品稀釋至終濃度為0.5 mg/mL。蛋白樣品使用什么溶液溶解，標準品也應用什么溶液稀釋，但是為了簡便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。將標準品按0、1、2、4、8、12、16、20 μL加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20 μL，相當于標準品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。
2. 根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5 mL BCA試劑A加100 μL BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24 h內穩定。
3. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，也加稀釋液到20 μL。
4. 各孔加入200 μL BCA工作液，37℃放置20~30 min。也可以室溫放置2 h，或60℃放置30 min。
5. 測定A562吸光值，540~595 nm之間的波長也可接受。根據標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。
   注意事項

1. 蛋白標準品配制后可立即使用，也可以-20℃長期保存。
2. BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育或適當延長孵育時間以獲得更好檢測效果。
3. 因為延長孵育時間會引起吸光值的變化，所以在用紫外分光光度計檢測時，應盡可能加快檢測速度，以免先檢后檢產生系統誤差。
4. 標準蛋白液的加量應當準確，如果加量不準確，會導致制作出來的標準曲線出現偏差，影響待測樣品的濃度計算，所以一方面需要用梯度稀釋的方法來配置標準蛋白液，另一方面應使用準確度高的移液槍。
    

 
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