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    Hygromycin B(潮霉素B)

    簡要描述:Hygromycin B(潮霉素B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細胞。

    • 產品型號:
    • 廠商性質:生產廠家
    • 更新時間:2022-08-25
    • 訪  問  量:199

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    Hygromycin B(潮霉素B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細胞。

    大腸桿菌( Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉移酶,將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產物,從而起到解毒作用。針對這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記,用來篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (Cat:AB11L234),Zeocin(Cat:AB11L251)和Blasticidin S(Cat:AB11L221)聯合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進入yin病毒感染增強通透性的細胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅蟲功能。

    訂購信息

    產品名稱

    貨號

    規格

    價格

    Hygromycin B(潮霉素B

    AB11L124

    1 g

    600


    運輸與保存

    藍冰運輸。-20℃保存,有效期48個月。

    技術參數

    1.CAS:31282-04-9

    2.溶解性:100mg/ml in Water

    3.純度:≥90%

    4.酶活/效價:≥950U/mg

    5.結構式:

    使用方法

    1.常用篩選濃度

    【注】:潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

    2.殺滅曲線的建立

    【注】:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素zui低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。

    (1)第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。

    (2)根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

    終濃度(μg/mL)

    培養基體積(ml)

    5mg/ml潮霉素B加入體積(ml)

    50

    9.9

    0.1

    100

    9.8

    0.2

    250

    9.5

    0.5

    500

    9.0

    1.0

    750

    8.5

    1.5

    1000

    8.0

    2.0




    (3)第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

    (4)接下來每3-4 d更換新的含藥物培養基。

    (5)按照固定的周期(如每2 d)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10 d)內能夠殺死絕大多數細胞的zui低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

    (3)穩定轉染細胞的篩選

    (1)轉染48 h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

    【注】:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效果很好。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%。

    (2)每隔3-4 d更換含有藥物的篩選培養液。

    (3)篩選7 d后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。

    (4)挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7 d。

    (5)之后更換正常培養基培養即可。

    注意事項

    1.本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

    2.潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發現于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

    3.本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。

    4.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    5.以上數據均來自公開文獻, 李記生物暫未本產品進行獨立驗證, 僅供參考。

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