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    Blasticidin S HCl (滅瘟素S)

    簡要描述:Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類抗生素,中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散,一般為鹽酸鹽。

    • 產品型號:
    • 廠商性質:生產廠家
    • 更新時間:2022-08-25
    • 訪  問  量:196

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    Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類抗生素,中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散,一般為鹽酸鹽。

    Blasticidin S常用于篩選攜帶bsr/BSD/bls基因(常標記為bsrr/bsdr/Blastr)質粒的哺乳動物穩定轉染細胞株,具有快速而強效的作用模式,很低的抗生素濃度便能使未攜帶抗性基因的細胞迅速死亡。

    本產品10mg/ml包裝配制在HEPES (pH7.4)緩沖溶液中,濃度為10mg/ml,經0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于細胞培養。本產品10mg和50mg包裝為粉末裝。

    Blasticidin S通過干擾核糖體結合肽段而特異性抑制原核細胞或真核細胞的蛋白合成。目前已經有3種滅瘟素耐受基因,一種是分離自鏈霉菌(Streptoverticillum sp.)的乙?;D移酶基因bls;另外兩種是脫氨酶基因,分別是從蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)中分離的bsr和從土霉菌(Aspergillus terreus)中分離的BSD基因。bsr和BSD基因是zui常用的篩選標志,用于哺乳動物和植物細胞的穩定細胞株篩選。Blasticidin S也可用于大腸桿菌(E. coli)等原核細胞的篩選。

    Blasticidin S具有快速而強效的作用模式,在很低的抗生素濃度下便能導致細胞快速死亡。大腸桿菌通常對50μg/ml的濃度敏感,而哺乳動物細胞對低至2-10µg/ml的濃度敏感。細胞死亡迅速發生,通??稍诓坏揭恢艿臅r間內即可形成具有Blasticidin S抗性的穩定哺乳動物細胞系。


    訂購信息


    產品名稱

    貨號

    規格

    價格

    Blasticidin S HCl (滅瘟素S)

    AB11L221

    10 mg

    940




    運輸與保存



    常溫運輸。4℃保存,有效期36個月。


    技術參數


    1.CAS:3513-03-9

    2.分子式:C17H26N8O5·HCl

    3.分子量:458.9

    4.純度:>95%

    5.結構式:


    使用方法


    1.推薦工作濃度

    推薦的作用于哺乳動物細胞的Blasticidin S濃度一般為1-50μg/ml,但最佳工作濃度需要通過劑量反應曲線來確定。

    表1.部分常見哺乳動物細胞的推薦工作濃度表

    細胞名稱

    細胞類型

    Blasticidin S濃度

    A549

    Human lung cancer

    10μg/ml

    CHO

    Chinese hamster ovarian

    5-10μg/ml

    HEK293

    Human embryonic kidney

    5-15μg/ml

    HeLa

    Human cervical cancer

    2.5-10μg/ml

    HepG2

    Human hepatocellular carcinoma

    4-5μg/ml

    Neuro2a

    Mouse neuroblasts

    30μg/ml

    HT1080

    Human fibrosarcoma

    5-20μg/ml

    MCF-7

    Human breast cancer

    2-5μg/ml

    THP-1

    Human monocytes

    10μg/ml

    B16

    Mouse melanoma tumor

    3-10µg/ml

    2.Blasticidin S劑量反應曲線的確定
      Blasticidin S的有效篩選濃度與細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關。為了篩選到具有Blasticidin S抗性的穩定細胞株,需要確定殺死未轉染/感染宿主細胞所需的Blasticidin S的zui低濃度,可以通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)。
    (1)第一天:將正常的細胞按照約25%的密度接種在適宜的細胞培養板上,于細胞培養箱內培養過夜。
    (2)第二天:將培養過夜的細胞培養基換成新鮮的含不同濃度Blasticidin S的篩選用培養基,Blasticidin S濃度可以設置為0、2、4、6、8和10μg/ml等,每個濃度設置2個復孔,于細胞培養箱內繼續培養。注:也可以根據自己的實驗體系,設置不同的濃度梯度。
    (3)每3-4 d更換新鮮的篩選培養基,并觀察存活細胞的比例。
    (4)選擇在加入Blasticidin S后7-10天殺死大多數細胞的zui低濃度為最佳篩選濃度。
    3.哺乳動物穩定表達細胞株的篩選
      轉染含有bsr或BSD基因的質?;蛘吒腥竞性摶虻牟《竞?,即可篩選穩定表達株。
    (1)細胞轉染或感染48h后,將細胞置于含有適當濃度Blasticidin S的新鮮培養基中培養,此為處理組。
    【注】:當細胞處于分裂活躍期時,抗生素作用zui明顯。細胞過于密集,抗生素產生的效力會明顯下降,所以細胞的密度最好不超過25%。建議同時做一個正常細胞的對照組。轉染或感染48 h后,如果細胞過密也可以消化后重新接種細胞,培養過夜后即可進行Blasticidin S篩選。
    (2)每3-4 d去除培養基,加入含Blasticidin S的新鮮培養基。

    (3)篩選7-10 d后,對照組正常細胞應該100%死亡,處理組中存活的細胞為表達bsr或BSD基因的細胞。然后根據實驗目的進行多克隆或單克隆細胞的篩選。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率,集落形成可能需要一周或更多的時間。
    (4)克隆形成后,挑取并轉移5-10個抗性克隆到35mm細胞培養板中,加入選擇培養基維持培養7 d。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。


    注意事項

    1.本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域

    2.用于細胞實驗,溶解后,須用一次性針頭濾器過濾除菌。

    3.抗生素不穩定,請在有效期內盡快使用。

    4.以上數據均來自公開文獻, 李記生物暫未本產品進行獨立驗證, 僅供參考。


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