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    Anti-Flag瓊脂糖凝膠

    簡要描述:Anti-Flag瓊脂糖凝膠Anti-Flag Affinity Gel可以實現高效快速的抗原分離。免疫沉淀試劑盒配有經過優化預制的緩沖液,為免疫沉淀實驗提供了最佳的反應條件,增強了免疫沉淀實驗的穩定性。本產品可廣泛應用于細胞裂解物、細胞分泌上清、血清、腹水等樣品中抗原的免疫沉淀反應。

    • 產品型號:AP64L243
    • 廠商性質:生產廠家
    • 更新時間:2022-04-29
    • 訪  問  量:210

    詳細介紹

    品牌自營品牌貨號AP64L243
    供貨周期現貨應用領域生物產業,制藥

    Anti-Flag瓊脂糖凝膠Anti-Flag Affinity Gel可以實現高效快速的抗原分離。免疫沉淀試劑盒配有經過優化預制的緩沖液,為免疫沉淀實驗提供了最佳的反應條件,增強了免疫沉淀實驗的穩定性。本產品可廣泛應用于細胞裂解物、細胞分泌上清、血清、腹水等樣品中抗原的免疫沉淀反應。


    訂購信息

    產品名稱

    貨號

    規格

    價格

    Anti-Flag瓊脂糖凝膠

    AP64L243

    1 mL

    1700




    運輸與保存


    常溫運輸。4℃保存,有效期24個月。


    技術參數

    Composition

    mouse IgG monoclonal Ab

    Matrix

    4% cross-linked agarose

    Particle size

    90 um

    Concentration

    50% settled resin in TBS with 0.02% sodium azide

    Binding Capacity

    ≥ 1 mg Flag-tagged fusion protein/mL of settled resin

    Application

    rProtein Purification,IP









    使用方法



    貼壁細胞樣品

    1.移去培養基,用PBS洗細胞兩次。

    2.收集細胞至1.5 mLEP 管內,按比例加入IP Lysis/Wash Buffer,同時加入PMSF等相應的抑制劑,混勻后置于冰上靜置5-20 min(期間混勻幾次)。

    3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min離心收集上清液,置于冰上以備后續實驗(或置于-80 ℃長期保存)。


    培養皿IP Lysis/Wash Buffer推薦使用體積:

    培養皿大小/表面積

    IP Lysis/Wash Buffer體積

    100 mm x 100 mm

    500-1000 µL

    100 mm x 60 mm

    100-300 µL

    6孔板

    100-200 µL

    懸浮細胞樣品

    1.4℃、500-1000 g、10 min,收集細胞,棄上清。

    2.用PBS 洗細胞一次,即用PBS 將細胞團重懸,4℃、500-1000 g、10 min,收集細胞,棄上清。

    3.用預冷的IP Lysis/Wash Buffer重懸細胞。每50 mg 細胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入PMSF等相應的抑制劑,混勻后置于冰上靜置5-20 min(期間混勻幾次)。

    4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min離心收集上清液,置于冰上以備后續實驗(或置于-80 ℃長期保存)。

    血清樣品

     一般建議建議用IP Lysis/Wash Buffer稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為50~150 µg/mL,置于冰上備用(或置于-20 ℃長期保存)。

    免疫沉淀

    【注】:為保證凝膠均勻分布,使用前通過反復顛倒或輕微渦旋混勻瓶中凝膠。

    1.將25 µL的Anti-Flag Affinity Gel加入1.5 mL 離心管中。

    2.向凝膠中加入500 µL 預冷PBS,輕柔混勻。

    3.將離心管放入離心機中1000rpm,5min收集凝膠到離心管的底部,去除上清。

    4.向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數次或輕微渦旋混勻1 min。將離心管放入離心機中1000rpm,5min收集凝膠到離心管的底部,去除上清。

    5.將制備好含有Flag標記蛋白的樣品加入裝有凝膠的離心管中,保持混勻室溫下孵育2-4 h。

    6.離心1000rpm,5min收集凝膠,除去未結合的樣品,保存以備分析。

    7.向離心管中加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer,輕柔混勻。收集凝膠,棄上清。再重復洗兩次。

    8.變性洗脫:向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer(1×),將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。通過磁力架分離磁珠,保留含有目的抗原的上清。

    【注】:如需保持蛋白活性,也可采用以下洗脫方式。

    低pH洗脫:向離心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵育離心管5-10 min。通過離心分離凝膠,保留含有目的抗原的上清。每100 µL洗出液中加入20 µL Neutralization Buffer來中和低pH。


    注意事項

    1.本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

    2.請勿高速離心、干燥或冷凍凝膠,這些操作會導致凝膠聚集而降低結合能力。

    3.IP實驗中不同類型的抗體與抗原結合的親和性是有區別的,抗體與抗原結合還會受到IP Lysis/Wash Buffer的影響,因此,如使用本實驗步驟不能獲得最佳的實驗結果,可自行優化操作細節或者篩選及配制緩沖液進行實驗,推薦使用李記生物的相關產品,參照相關產品推薦。

    4.微球使用前應充分振蕩均勻。微球應保存在儲存溶液中,防止干燥。


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